РАЗРАБОТКА ЭКСПРЕССНОЙ МЕТОДИКИ ОБНАРУЖЕНИЯ НЕКОТОРЫХ ПРОИЗВОДНЫХ ПИРИДИНА

Громова З.Ф., к.ф. н., доцент, Чекулаева Г.Ю., к. б. н., доцент

Федеральное государственное бюджетное

образовательное учреждение высшего образования

«Рязанский государственный медицинский университет

имени академика И.П. Павлова»

Министерства здравоохранения Российской Федерации, Россия, г.Рязань

Аннотация. Показана возможность проведения анализа лекарственных средств, производных пиридина, с использованием реактивных индикаторных полосок (РИП). Данная методика соответствует основным требованиям, предъявляемым к внутриаптечному и лабораторному химическому контролю: быстрота проведения анализа, минимальная затрата анализируемого объекта, возможность проведения анализа без изъятия изготовленного лекарственного средства. Объектом исследования являлся противотуберкулезный препарат изониазид – производный пиридина. Разработанная методика с использованием РИП позволяет проводить обнаружение изониазида при фармацевтических и химико-токсикологических исследованиях.

Ключевые слова: реактивные индикаторные полоски, изониазид, фармацевтические исследования, химико-токсикологические исследования.

Актуальность: определяется тем, что изониазид относится к основным химиотерапевтическим средствам для лечения различных форм туберкулеза. Процесс лечения достаточно длительный: курс лечения составляет от 3 до 6 месяцев [1, стр 205 ], [2, стр 858]. При этом требуется постоянный контроль за результативностью приема лекарства, содержанием препарата в крови и его выведением для предотвращения передозировки.

Цель работы: разработка экспрессной методики обнаружения противотуберкулезного препарата изониазида при фармацевтических и химико-токсикологических исследованиях с использованием РИП.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Выбрать из имеющихся на изониазид те цветные реакции, которые в большей степени отвечали бы поставленным задачам исследования.

2. Приготовить реактивные полоски.

3. Разработать методику анализа и апробировать ее на стандартном водном растворе изониазида.

4. Изучить чувствительность используемых цветных реакций.

5. Изучить сроки хранения приготовленных РИП.

Материалы и методы исследования: 1.В подкисленный хлороводородной кислотой стандартный 0,01%-ный раствор изониазида опускали реактивную полоску с метаванадатом аммония. Наблюдали красно-коричневое окрашивание РИП. 2. В подкисленный хлороводородной кислотой стандартный 0,01%-ный раствор изониазида добавляли раствор тиоционата аммония и раствор хлорамина. В полученную смесь опускали полоску с 4-оксоурацилом. При нагревании на водяной бане в течение 5 минут полоска приобретала синее окрашивание.

Результаты и обсуждение: Основными требованиями, предъявляемыми к внутриаптечному и лабораторному химическому контролю являются быстрота проведения анализа, минимальная затрата анализируемого объекта, возможность проведения анализа без изъятия изготовленного лекарственного средства. Иногда для качественных испытаний применяют фильтровальную бумагу, пропитанную соответствующим реактивом (РИП), доступным а аналитических кабинетах и химических лабораториях. Часто для пропитки РИП используют химические реагенты в смеси со вспомогательными веществами: компонентами буферных растворов, маскирующими, эмульгирующими, закрепляющими соединениями, катализаторами и другими веществами. Другой способ получения РИП – иммобилизация хромогенных реактивов на модифицированной целлюлозной основе (картон, бумага, гранулы). Такие РИП можно длительно хранить и применять многократно.

Реактивные индикаторные полоски применяют для качественного и количественного экспресс-анализа например, природных и сточных вод; универсальные индикаторные полоски, содержащие от 4 – 6 кислотно-основных индикаторов, используют для определения рН среды раствора в области от 0 до 14; йодкрахмальная полоска, содержащая калия йодид и крахмал используется в качестве внешнего индикатора в нитритометрии. Кроме того, РИП широко применяются в медицине для экспресс-анализа, например, содержания глюкозы в крови и моче, ацетона в моче.

Следует отменить достоинства использования РИП перед другими методами анализа:

1. Быстрота выполнения анализа и экономия времени.

2. Простота выполнения анализа, что делает его доступным даже для больного.

3. Отсутствие необходимости в каком-либо вспомогательном оборудовании, что значительно снижает материальные затраты на исследование.

4. Сухие реактивы устойчивее жидких, компактнее, удобнее при транспортировке и хранении.

Изониазид является гидразидом изоникотиновой кислоты, для обнаружения которого в фармацевтическом анализе применяется ряд цветных реакций на пиридиновый цикл и гидразидную группу, в том числе реакция образования глутаконового альдегида и полиметиновых красителей, а также комплексных соединений с солямя d-элементов. Наиболее оптимальными для решения поставленных задач были выбраны две реакции: реакция образования полиметинового красителя с 4 оксоурацилом и реакция комплексообразования с метаванадатом аммония [3, стр 130], [4, стр 100]. Первая реакция позволяет определить суммарно нативный изониазид и его основной метаболит – N-ацетилизониазид. Реакция с метаванадатом аммония – только нативный изониазид. Таким образом, выбранные нами реакции дают возможность применить их в химико-токсикологических исследованиях биологических жидкостей для определения как нативного изониазида, так и его метаболита.

Для изучения чувствительности реакций готовили ряд разведений раствора изониазида в пределах от 0,008 до 0,0001 г/мл и проводили исследования по указанным методикам. Результаты исследования представлены в таблице 1.

Табл. 1. Результаты изучения чувствительности реакций с реактивными индикаторными полосками

№ п/п	Концентрация стандартного раствора изониазида, г/мл	РИП
		с метаванадотом аммония	с 4-оксоурацилом
1.	0,008	+	+
2.	0,006	+	+
3.	0,004	+	+
4.	0,002	+	+
5.	0,001	+	-
6.	0,0005	+	-
7.	0,0002	+	-
8.	0,0001	-	-

Таким образом, чувствительность реакции с метаванадатом аммония составила 0,0002 г/мл, а чувствительность реакции с 4-оксоурацилом – 0,002 г/мл. Бумажные полоски оставались активными в течение двух месяцев наблюдения. Исследования продолжаются.

Выводы:

Разработана экспресс-методика обнаружения изониазида в стандартном растворе с помощью реактивных индикаторных полосок, позволяющая проводить фармацевтические и химико-токсикологические исследования.

Список литературы:

1. Страчунский Л.С.Козлов С.Н. Современная антимикробная химиотерапия: руководство для врачей. Москва: Боргес, 2002. 432 с.

2. Машковский М.Д. Лекарственные средств. 15-е изд., перераб., испр. и доп. Москва: РИА «Новая волна», 2007. 1206 с.

3. Чекулаева Г.Ю., Громова З.Ф. Метод количественного определения некоторых производных пара-аминофенола в фармацевтических и химико-токсикологических исследованиях. //Российский медико-биологический вестник имени академика И.П.Павлова. 2014. №2. С.129 -133.

4. Чекулаева Г.Ю., Громова З.Ф. Разработка и усовершенствование метода анализа некоторых производных изоникотиновой кислоты в фармацевтическом и химико-токсикологическом исследованиях //Успехи современного естествознания. 2015. №11. С.98 – 101.